ThermoStable V Reverse transcriptase試劑是在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進(jìn)行定點(diǎn)突變改良而得。

該酶去除了RNase H活性中，從而避免反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中降解RNA。同時(shí)經(jīng)過(guò)突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，

可耐受65℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開(kāi)RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，

從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長(zhǎng)度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量

ThermoStable V RTase (200 U/μl)100 μl

10×RT Buffer1 ml

單位定義

以poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在37°C條件下，10分鐘內(nèi)催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，

定義為一個(gè)活性單位。

儲(chǔ)存

-20°C可保存2年。

ThermoStable V Reverse transcriptase試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。